Even een laatste update in het project voor ik kan genieten van de Carnavalsvakantie. Doorheen het project heb ik mijn twee plasmiden (pX 330 en pX 459) beiden eens geknipt met het BbSI en BbSI-HF. Hierbij waren er drie situaties mogelijk: het dubbestrengig DNA is volledig geknipt, één streng van het DNA is geknipt of het DNA is niet geknipt. Door deze onzekerheid is het dus niet evident om de insert in het plasmide te ligeren en te transformeren in DHA5alfa cellen. Hierdoor heb ik dan allereerst een controle ligatie en transformatie uitgevoerd zonder insert. Wanneer de plasmiden volledig geknipt werden door BbSI of BbSI-HF, kunnen de plasmiden niet geligeert worden door de assymmetrische eindjes waardoor er dus ook geen kolonies gevormd kunnen worden na de transformatie. Dit in tegenstelling tot de andere twee mogelijke situaties waarbij er wel nog kolonies gevormd kunnen worden. In totaal werden dus vijf ligaties en transformaties uitgevoerd (de positieve controle + pX 330 = ongeknipt plasmide-DNA, pX 330 BbSI, pX 330 BbSI-HF, pX459 BbSI en pX 459 BbSI-HF). Zoals te zien is op de afbeelding, waren de resultaten veelbelovend. De positieve controle vertoonde veel kolonies zoals verwacht. De platen met de geknipte plasmiden vertoonden geen tot amper kolonies. Uit deze resultaten kon besloten worden dat de transformatie gelukt was (af te leiden uit de positieve controle) en dat de enzymen volledig geknipt hadden (op de enkele kolonies na). Per situatie zijn er twee platen ( NA = de cellen werden niet afgedraaid, A = de cellen werden afgedraaid en hersuspendeert in LB). Met deze mooie resultaten heb ik mijn eerste drie weken stage al mooi kunnen afsluiten. Met een goed gevoel ga ik de Carnavalsvakantie in. Tijdens deze week zal het vooral werken zijn aan de literatuurstudie, maar een beetje ontspanning kan nooit kwaad! ;)
Comments