Maandag is de beslissing gevallen aan welk onderwerp ik zal werken, namelijk electroporatie van humane cellen. Het is de bedoeling om een modelsysteem op te stellen waar GFP positief humane cellen kunnen aangepast worden. Als gevolg zal men dan het GFP kunnen uizetten of omzetten van BFP. Deze handeling zal gebeuren via het CRISPR-CAS principe. Er zullen 2 soorten vectoren worden gebruikt (pX330 en pX549) die gekloneerd zullen worden via klassieke klonering. Na het verkrijgen van de juiste vectoren zullen deze geplaatst worden in K562-GFP cellen. Om de transfectie te testen en te optimaliseren, zal er gebruik gemaakt worden van de amaxa en/of Neon nucleofectie apparatuur. Als laatste stap zal GFP bepaald worden via flowcytometrie en fluorescentiemicroscopie. Detectie van BFP kan enkel via fluorescentiemicroscopie.
Comentarios